实验室常用灭菌方式介绍及应用

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一、干热灭菌


常用于耐热器皿的灭菌，如移液管、玻璃平皿、玻璃试管或金属器皿等，可在170℃灭菌2-4h或200℃灭菌0.5-1h。接种环、接种针、涂布棒等实验器材可在酒精灯上直接进行灼烧灭菌。
灭菌效果：灭菌效果强，可杀灭包括芽孢在内的所有微生物。
注意事项：
1.干热灭菌过程的热穿透效果差且比较慢，因此在烘箱内进行干热灭菌时，不可摆放过满；
2.塑料、橡胶等不耐热材质不可采用此方法灭菌；
3.纸张、棉花灭菌温度不能超过170℃；制备好的培养基不可采用此方法灭菌。


二、高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）


常用于实验室多数培养基灭菌，也可用于玻璃器皿、金属器皿的灭菌。一般采用121℃高压灭菌15-20min或116℃高压灭菌30min，根据培养基不同可对灭菌参数进行调整。
灭菌效果：可杀灭包括芽孢在内的所有微生物。
注意事项：
1.灭菌锅效力不达标、灭菌过程冷空气未排净、培养基本身含芽孢过多、灭菌方式不正确、灭菌锅内物品摆放过满都有可能导致灭菌失败；
2.在进行容器灭菌时，容器不可密封，需与灭菌锅内空气流通。


三、水浴/加热/流动蒸汽灭菌


常用于含不耐热成分的培养基灭菌，如XLD琼脂、亚硒酸盐胱氨酸增菌液、亚硫酸铋琼脂等。采用流动蒸汽方式灭菌的培养基，如没有相应的流动蒸汽灭菌设备，可采用水浴加热方式或“蒸”的方式灭菌。
灭菌效果：可杀灭微生物繁殖体，不能杀灭芽孢体，采用此类方式灭菌的培养基通常具有强抑菌性，或要求短时间内使用。
注意事项：
1.不同培养基成分耐热性有差别，加热时应当注意，如含亚硒酸盐的培养基（SC、SBG等）加热至90℃左右即可，加热过度会使亚硒酸氢钠分解，培养基变红，含琼脂的培养基可加热煮沸4-6次或沸水浴20-30min使琼脂完全溶解即可；
2.采用加热灭菌方式的培养基，通常含有不稳定成分，建议现配现用或按标准规定的期限使用，如不立即使用，可置于低温或阴凉（2-8℃或10-20℃）处避光保存。


四、过滤除菌


常用于抗生素或含不耐热成分培养基的灭菌，一般使用0.22μm孔径的微孔滤膜或滤芯进行过滤除菌。实验室制取无菌空气也可采用此方法，使用特殊滤芯或滤网对空气进行过滤除菌。
灭菌效果：可除去普通细菌、真菌及芽孢体，但不能除去支原体、病毒等体积微小生物。
注意事项：
1.使用前通常需按照说明书使滤膜或滤芯浸湿；
2.注意过滤速度和体积，需严格按照过滤器或滤膜说明使用，速度过快或过滤体积超标都有可能导致滤膜破损，除菌失败；
3.黏度较大或有沉淀的培养基不适合用此方式除菌。


五、辐照灭菌


微波、紫外线、X射线和γ射线等均可用于灭菌。γ射线穿透力强，灭菌效果好，被广泛应用于食品、药品行业产品灭菌，也常用于微生物培养基、实验器材灭菌。一些特殊培养基或添加剂成分因不适合高温蒸汽灭菌、过滤除菌等方法，可采用γ射线辐照灭菌。紫外线杀菌效果较弱，几乎没有穿透力，通常仅用于实验室空气或物体表面杀菌。
灭菌效果：γ射线灭菌效果好，穿透力强，可杀死包括芽孢体在内的所有微生物。
注意事项：
1.并非所有培养基都可以采用γ射线辐照灭菌方式，一些染料或不稳定成分经辐照后会发生变化；
2.γ射线会对琼脂造成一定程度破坏，因此在进行固体培养基灭菌时，需对辐照剂量和琼脂添加量进行适当调整；
3.玻璃制品、金属制品一般不可采用此方法灭菌。


六、化学试剂灭菌


常用环氧乙烷灭菌，以及各类消毒剂浸泡灭菌。环氧乙烷曾广泛用于平皿、一次性医疗产品的灭菌，但由于对环境污染较大，灭过菌的产品需长时间放置使环氧乙烷消散，现已逐步被其他灭菌方式取代。
灭菌效果：不同消毒剂杀灭效果存在差异，大致上可分为低效消毒剂、中效消毒剂和高效消毒剂。环氧乙烷属于高效消毒剂，可杀灭包含芽孢在内的所有微生物。
注意事项：
1.此类灭菌方式通常会有残留，且对环境有污染，因此一般不适合用于直接进行微生物培养相关器皿灭菌；
2.杀菌能力越强的消毒剂，刺激性、腐蚀性、毒性往往越大，使用时需注意防护。


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